目的 探讨溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)对大鼠脑缺血再灌注(CIRI)后小胶质细胞(MG)损伤的作用,及对自噬的影响及机制。
方法 选取30只成年健康SD大鼠,采用短暂性大脑中动脉栓塞(transient middle cerebral artery occlusion, tMCAO)法建立大鼠模型,按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、手术组(tMCAO组)、干预组(tMCAO+CQ组),每组10只。3组大鼠术前均腹腔注射无菌生理盐水,tMCAO+CQ组于术前2 h注射氯喹(CQ)溶酶体抑制剂。每组取5只用于TTC染色,剩余5只取脑组织标本按序完成实验检测。取大鼠脑组织中缺血半暗带区组织,检测细胞中LAMP1蛋白的表达量。为探讨LAMP1在模型中致MG损伤和自噬作用,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测致炎症因子[白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10]的表达,采用Western blot检测p62、Cathepsin B、Cathepsin D、LC3B蛋白的表达情况。此外,采用Longa分制法评估大鼠CIRI后24 h的神经功能,TTC染色测定脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理学变化。
结果 相较于Sham组,tMCAO组和tMCAO+CQ组的Longa评分明显升高,脑梗死体积明显增加,且tMCAO+CQ组的Longa评分高于tMCAO组,脑梗死体积大于tMCAO组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA和Western blot检测结果显示,相较于Sham组,tMCAO组与tMCAO+CQ组的LAMP1蛋白表达明显下降,IL-6、TNF-α含量及LC3B、Baclin1蛋白表达水平明显升高,IL-10含量及LAMP1、p62、Cathepsin B及Cathepsin D蛋白表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);相较于tMCAO组,tMCAO+CQ组LAMP1蛋白表达明显下降,IL-6、TNF-α含量及LC3B、Beclin1蛋白表达水平升高,p62和Cathepsin D蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05),而Cathepsin B蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论 在大鼠CIRI模型中,抑制LAMP1对MG损伤有明显的加重作用,该机制可能与诱导自噬障碍有关。