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中华神经创伤外科电子杂志

中华神经创伤外科电子杂志 ›› 2023, Vol. 09 ›› Issue (01) : 7 -11. doi: 10.3877/cma.j.issn.2095-9141.2023.01.002

基础研究

周围神经损伤对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化影响的研究
刘然然1, 方倩倩2, 唐泽文1,†()   
  1. 1. 230000　合肥，安徽医科大学附属合肥医院康复医学科
    2. 230000　合肥，安徽医科大学第二附属医院消化内科
  • 收稿日期:2023-01-04 出版日期:2023-02-15
  • 通信作者: 唐泽文

Effects of peripheral nerve injury on the proliferation and osteogenesis differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells

Ranran Liu1, Qianqian Fang2, Zewen Tang1,†()   

  1. 1. Department of Rehabilitation Medicine, Hefei Hospital Affiliated to Anhui Medical University, Hefei 230000, China
    2. Department of Gastroenterology, The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University, Hefei 230000, China
  • Received:2023-01-04 Published:2023-02-15
  • Corresponding author: Zewen Tang
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引用本文：

刘然然, 方倩倩, 唐泽文. 周围神经损伤对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化影响的研究[J]. 中华神经创伤外科电子杂志, 2023, 09(01): 7-11.

Ranran Liu, Qianqian Fang, Zewen Tang. Effects of peripheral nerve injury on the proliferation and osteogenesis differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Chinese Journal of Neurotraumatic Surgery(Electronic Edition), 2023, 09(01): 7-11.

目的

通过建立坐骨神经损伤模型，观察周围神经损伤对骨髓间充质干细胞（BMSCs）生长增殖及成骨分化的影响。

方法

取4周龄、健康、SPF级雄性SD大鼠20只，建立一侧下肢坐骨神经损伤模型，术后4周分别提取健侧（对照组）和术侧（实验组）骨髓间充质干细胞，进行体外培养增殖，采用流式细胞术检测BMSCs表面标志物，MTT实验检测2组细胞的活性；同时取P3代细胞行成骨诱导分化，并通过碱性磷酸酶（ALP）活性检测、茜素红染色对比2组细胞成骨分化能力。

结果

流式细胞术检测提示2组细胞CD90阳性，CD11b阴性；MTT实验结果显示实验组BMSCs生长速度相对较慢，较迟进入平台期；成骨诱导分化后，实验组钙化结节、ALP活性的吸光度值均低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。

结论

周围神经损伤可抑制BMSCs增殖及其向成骨细胞的分化。

关键词: 周围神经损伤, 骨髓间充质干细胞, 成骨分化
Objective

To explore the effect of peripheral nerve injury on the proliferation and osteogenesis differentiation of bone mesenchymal stem cells (BMSCs) by establishing sciatic nerve injury model.

Methods

Twenty four-week-old, healthy, SPF grade male SD rats were selected to establish the sciatic nerve injury model of one side of the lower limb. Four weeks after operation, BMSCs were isolated from the healthy side (control group) and the operative side (experimental group), and cultured and proliferated in vitro. The surface markers of BMSCs were identified by flow cytometry, and the activity of cells in the two groups was detected by MTT assay; at the same time, P3 cells were taken for osteogenic differentiation, and the osteogenic differentiation ability of the two groups was compared by alizarin red staining and alkaline phosphatase (ALP) activity detection.

Results

The flow cytometry indicated that CD90 was positive and CD11b was negative in the two groups. MTT test showed that the growth rate of experimental group was lower than the control group. After BMSCs induced differentiation into osteoblasts, the absorbance value of calcified nodules and ALP activity in the experimental group were lower than those in the control group, and the difference was statistically significant (P<0.05).

Conclusion

Peripheral nerve injury are able to inhibit BMSCs proliferation and differentiation to osteoblasts.

Key words: Peripheral nerve injury, Bone mesenchymal stem cells, Osteoporosis differentiation
图1 流式细胞术鉴定骨髓间充质干细胞A：实验组CD11b阴性；B：对照组CD11b阴性；C：实验组CD90阳性；D：对照组CD90阳性
Fig.1 Identification of bone marrow mesenchymal stem cells by flow cytometry
图2 2组细胞生长曲线图
Fig.2 Cell growth curves of the two groups
表1 2组细胞的吸光度值比较（±s）
Tab.1 Comparison of cell absorbance values between the two groups (Mean±SD)
组别 第1天 第2天 第3天 第4天 第5天 第6天 第7天
实验组 0.39±0.03 0.41±0.02 0.48±0.04 0.52±0.03 0.55±0.03 0.59±0.03 0.61±0.02
对照组 0.50±0.01 0.55±0.03 0.60±0.03 0.65±0.02 0.68±0.05 0.70±0.03 0.75±0.01
t值 6.025 -2.127 -4.170 -6.268 -3.867 -4.489 -2.911
P值 0.009 0.008 0.031 0.011 0.039 0.028 0.002
图3 显微镜下BMSCs及成骨分化后茜素红染色结果（×200）A：第三代BMSCs；B：对照组茜素红染色结果；C：实验组茜素红染色结果；BMSCs：骨髓间充质干细胞
Fig.3 Alizarin red staining results of BMSCs and osteogenic differentiation under microscope (×200)
表2 2组细胞的钙化结节、ALP活性的吸光度值比较（±s）
Tab.2 Comparison of absorbance values of calcified nodules and ALP activity between the two groups (Mean±SD)
组别 钙化结节 ALP
实验组 0.48±0.02 0.55±0.01
对照组 0.60±0.03 0.66±0.03
t值 -5.769 -6.024
P值 0.014 0.009
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